分光光度計的帶寬(bandwidth)很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度。可以投射出實驗要求的光譜。一種嚴格帶寬使得儀器能對復雜的混合物進行高分辨率的吸光測量??勺兊膯紊珒x的狹縫寬度能使一臺分光光度計滿足多種實驗需要。
分光光度計是精密儀器,正確安裝、使用和保養(yǎng)對保持儀器良好的性能和保證測試的準確度有重要作用。
1.對儀器工作環(huán)境的要求
分光光度計應安裝在穩(wěn)定的工作臺上,(周圍不應有強磁場, 以防電磁干擾),室內(nèi)溫度應保持在(10~30)℃。室內(nèi)應干燥,相對濕度宜控制在<85 %,室內(nèi)應無腐蝕性氣體,光線不宜過強。
2.儀器保養(yǎng)和維護方法
(1)儀器工作電壓一般為220V,允許±10 %的電壓波動。為保持光源燈和檢測系統(tǒng)的穩(wěn)定性,在電源電壓波動較大的實驗室配備穩(wěn)壓器。
(2)為了延長光源使用壽命,在不用時不用開光源燈。如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定,應及時更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置,不要用手直接接觸窗口或燈泡,避免油污沾附,若不小心接觸過,要用無水乙醇擦拭。
(3)單色器是儀器的核心部分,裝在密封盒內(nèi),不能拆開,為防止色散元件受潮發(fā)霉,必須經(jīng)常更換干燥劑。
(4)必須正確使用吸收池,保護吸收池光學面。
(5)光電轉(zhuǎn)換元件不能長時間曝光,應避免強光照射或受潮積塵。
分光光度計的檢驗小妙招
1.波長準確度的檢驗:
分光光度計在使用過程中,由于機械振動、溫度變化、燈絲變形、燈座松動或更換燈泡等原因,經(jīng)常會出現(xiàn)刻度盤上的讀數(shù)與實際通過溶液的波長不符合的現(xiàn)象,
因而導致儀器靈明度降低,影響測定結(jié)果的精度,需要進行檢驗。
檢驗波長準確度簡單的方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測量儀器的吸收峰值, 如果測出的值與濾光片標準值之差超出規(guī)程規(guī)定, 則需要進行波長調(diào)節(jié)。
2.透射比正確度的檢驗:
用透射比標準值分別為10 %、20 %、30 %左右的光譜中性濾光片,可見光區(qū)分別在440、546、635nm波長處,以空氣為參比,分別測量各濾光片的透射比,紫外光區(qū)用重鉻酸鉀溶液分別在235、257、313、350nm波長處,以高氯酸溶液為參比,測量其透射比。
3.穩(wěn)定度的檢驗:
在零點不受光的條件下,用零點調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點,觀察3分鐘讀取透射比的變化,即為零點穩(wěn)定性。在儀器測量范圍兩端向中間靠10nm處,調(diào)節(jié)零點后,蓋上樣品室蓋(打開光門),使光電管受光,調(diào)節(jié)透射比為95%(數(shù)顯儀器調(diào)至100%)察3分鐘讀取透射比的變化,為光電流穩(wěn)定性。
4.光的檢驗:
可見分光計棱鏡式儀器在420nm處,光柵式儀器在360nm處,紫外分光計在220nm處分別用符合規(guī)定的截止濾光片,以空氣為參比,測量其透射比值,即為儀器在相應波長下的雜散輻射率。
為了測量吸光值,分光光度計制造商通常使用光電倍增管(photo-multiplier tubes,PMTs)和光敏二極管。提供快速的反應時間和良好的靈敏度,并且可以在紫外光譜調(diào)節(jié)至特定的范圍。但一些制造商依賴于光敏二極管的動態(tài)范圍在數(shù)秒內(nèi)行使所有的光譜測量。